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基于單相流微流控技術(shù)的單細胞分析系統(tǒng)

單相流微流體捕獲系統(tǒng)主要包括流體動力學(xué)捕獲、磁力捕獲、介電泳捕獲、聲學(xué)捕獲、光學(xué)捕獲等。這些單細胞的捕獲方法最近得到了很好的總結(jié)。

(a)流體動力捕捉器利用微流體通道中獨特的微觀結(jié)構(gòu)和閥門來控制流體流動,從而不需要使用其他裝置來收集單個單元。微流體通道的結(jié)構(gòu)就像一個過濾器,它把細胞困在流動的流體中,因此得到了大量的單細胞,不足之處是會造成相當大的細胞數(shù)量的損失。本文介紹一種微流體動力學(xué)在數(shù)字單細胞分析中的捕獲系統(tǒng)。該微流控裝置具有一種特殊的旁路結(jié)構(gòu),它能改變流體動力學(xué),通過一系列旁路結(jié)構(gòu)捕捉單個細胞,其單細胞捕集效率可達90%左右。

2016年,提出了一種基于單細胞陷阱技術(shù)的新型微流控器件,其原理是等效電阻電路。它遵循最小阻力路徑的原則,能夠捕捉確定性的單細胞,實現(xiàn)大規(guī)模、高效和靈活的細胞捕獲。

(b)磁力分離技術(shù)以磁力為基礎(chǔ),通過免疫磁標記的核酸探針或磁珠修飾與待測物雜交。這樣,通過磁場處理的微流體設(shè)備就可以捕捉到磁標的目標物。可通過正選選擇(收集與磁珠相連的靶材)或反向選擇(也就是說,收集不帶磁珠的目標物)。其唯一缺點是磁性捕獲的專一性取決于抗體和引物的設(shè)計。

(c)介質(zhì)電泳捕獲介電泳(DEP)是一種可極化粒子在非均勻電場中運動的現(xiàn)象。采用電動操縱是常用的單片機控制方法。

該方法是用涂有細胞結(jié)合劑的顯微載玻片,并以薄電極陣列為模板,用電信號激發(fā)這些電極陣列,使之受到DEP的作用,實現(xiàn)了從載玻片懸浮細胞中直接捕捉不同類型的細胞。

用負DEP(nDEP)誘捕一株未接觸酵母細胞進行單細胞增殖的實驗。利用基于絕緣介質(zhì)的雙向電泳(iDEP),從哺乳動物外周血單核細胞(PBMC)混合物中捕獲單個哺乳動物乳腺癌細胞(MCF-7)。

微流控.png

利用外電場的不同作用,實時觀察細胞活力變化。本文對DEP誘捕細胞實驗中產(chǎn)生的熱效應(yīng)與細胞間的直接相互作用進行了理論和實驗研究。(d)聲學(xué)捕捉表面聲波,作為一種非接觸的方法,既可以探測特定的分析物,也可以將單個細胞局限于微流體通道。它是一種聲陷波器捕捉細胞的原理,其原理是使用一對數(shù)字互感器(IDT)在施加電流、陷波器或凝聚層中產(chǎn)生超聲駐波。研制了一種基于駐波表面聲波(SSAW)的微流體控制裝置,用于有限數(shù)量的細胞樣本的連續(xù)富集,用于進一步的細胞研究。當前,聲捕獲器與光鉗系統(tǒng)結(jié)合在一起,可將其與微流場耦合在一起,具有良好的生物相容性和易于制造的特性,可用于顆粒和細胞的動態(tài)濃縮。

(e)除了上述單細胞捕獲系統(tǒng)之外,基于慣性力和粘彈性微流體的單細胞分離系統(tǒng)也成為了單細胞分離技術(shù)的發(fā)展趨勢,而精確而高通量的單細胞分離也是機械分離細胞間功能異質(zhì)性的重要手段。2015年,孫佳姝研究組開發(fā)了一種結(jié)合集成膜過濾器基于慣性的微流體細胞分選儀,基于大小、無標簽、高效地分離富集全血循環(huán)腫瘤細胞,CTCs的分離效率達74.4%。在2018年,他們又報道了一個粘彈微流體系統(tǒng),它可以在不需要任何細胞標記的情況下,直接從全血中選擇性地分離腫瘤細胞。

在單胞外小泡的分離和檢測方面取得了突破性進展,并發(fā)展了一種基于粘彈性分離及核酸適配體識別的微流控分離芯片,實現(xiàn)了單個胞外小泡的選擇性分離及對其表面蛋白的分析。結(jié)果表明,微流控生物芯片可以實現(xiàn)高通量單細胞檢測和分離,可望實現(xiàn)高精度的臨床診斷等領(lǐng)域。



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