伏馬毒素（Fumonisin，FB）是由鐮刀菌屬在一定的溫度和濕度下產生的水溶性代謝產物，對食品污染的情況在世界范圍內普遍存在，主要污染玉米及玉米制品。動物試驗和流行病學資料已表明，伏馬菌素主要損害肝腎功能，能引起馬腦白質軟化癥和豬肺水腫等，并與我國和南非部分地區高發的食道癌有關，現已引起世界范圍的廣泛注意。
伏馬毒素的檢測國內外已建立了多種方法。伏馬毒素的分析方法通常包括提取、純化、分離和檢測幾個步驟。目前，大多數方法均采用免疫親和柱（Pribolab）純化樣品，應用HPLC或GC結合不同的檢測器進行。

伏馬毒素（B1, B2,和B3)是由鐮孢菌(霉)屬念珠菌產生的真菌毒素。在世界范圍內都發現了伏馬毒素污染玉米的現象。研究表明伏馬毒素可以誘發老鼠患肝癌，豬的肺水腫和馬的腦脊髓白質病。在一些地區中玉米中伏馬毒素含量很高，在這些地區（比如中國和非洲）人的食道癌具有高發性。

適用

PriboFast伏馬毒素試劑盒原理是競爭酶聯免疫反應，用于檢測玉米中的伏馬毒素。

原理

這個 Pribolab伏馬素素檢測試劑盒的原理是固相直接競爭酶聯免疫反應。聚苯乙烯微孔板中包被伏馬毒素的特異性抗體，這種抗體和伏馬毒素的各個亞型都有很好的交叉反應。利用90%的甲醇從樣品中提取伏馬毒素，把提取的樣品和HRP（辣根過氧化物酶）標記的伏馬毒素混勻并加入對應的孔檢測。酶標記毒素與標準品或樣品中的伏馬毒素競爭與包被在微孔底部的抗體結合。孵育一段時間后，倒出孔里的液體，清洗除去沒有反應的物質后加入顯色底物（TMB），在酶的作用下孔里將會出現藍色。顯色顏色的深淺與結合物的量成正比例的關系，與標準品或樣品中伏馬毒素的量成反比例關系。所以，標準品或樣品中的伏馬毒素濃度越高，顯色的藍色將會越淺。加入酸，終止反應，底物顏色由藍色變為棕黃色。微孔板放進酶標儀里，在OD450nm讀取吸光度值。樣品的吸光度值與試劑盒中標準OD值相比較，相對應得出結果。

提取步驟中需要的材料

• 研磨器；
• 燒杯：125ml；
• 天平：量程為20g
• 量筒：100ml
• 甲醇：每個樣品36ml 
• 蒸餾水：每個樣品4ml
• 濾紙 ：用針孔過濾器代替；漏斗

測定步驟：

• 100μL或200μL 單道或多道移液器；計時器； 洗瓶；吸水紙；450nm 濾光片的酶標儀
• 警告和注意事項
• 使用前將所有的試劑拿到室溫（19℃-27℃）。
• 試劑貯存在2℃到8℃，不要使用過期的產品。不要冰凍試劑盒。
• 沒有用完的試劑不要回收到原試劑瓶中。操作過程中按照要求精確量取試劑體積。
• 整個操作過程要嚴格按照要求的時間和溫度。
• 不要用口移取試劑或樣品。
• 終止液里含有酸，不要與皮膚和眼睛接觸。如果有接觸，一定要用清水清洗。
• 所有的材料、試劑和儀器可能被樣品或標準品中的伏馬毒素污染，在操作過程中一定要戴手套。
• 使用完畢，處理好所有的材料、試劑和儀器。

樣品提取步驟
注意：樣品必須按照有關規定收集

• 配制90%的甲醇溶液（每個樣品需要：4ml蒸餾水+36ml甲醇）
• 研磨代表性樣品（使50%的樣品可以通過一個20目的濾網）。
• 稱量20g研磨過濾后的樣品加入40ml 90%的甲醇溶液，樣品稀釋比為1:2(w/v)。
• 在密封的容器里混合，至少震蕩1分鐘。
• 靜置、過濾5-10ml 以上處理的液體，收集濾液。
• 以1：20的比例稀釋濾液（取0.1ml樣品提取液然后加入1.9ml的蒸餾水或無離子水）
• 樣品最終稀釋倍數為1：40，待測。

樣品測定步驟
注意：在操作時推薦使用排槍，同時每個樣品都做2個平行。

• 使用前將試劑拿到室溫。用1L水溶解PBS-Tween 袋。
• 取出混合板放于微孔支架上用于標準和樣品的測試，取相同數量的微孔（包被有抗體）置于另一個微孔支架上。
• 在每個混合板微孔中加入先加入100μl 結合物溶液A(綠色)，然后再加入100ul結合物溶液B（無色）。
• 在加有結合物的混合版的孔中加入100 μl 標準或樣品，用槍頭混合3次，
• 轉移100ul預混板微孔中的液體到對應的包被有抗體的微孔中，室溫孵育10分鐘，最好使用多道移液器。混合空中的液體足夠做兩個平行。
• 將孔里的液體倒入合適的容器中，用蒸餾水或無離子水洗板，然后迅速棄掉洗液到合適的容器中，重復洗3次。在一層厚的吸水紙上拍板，去掉殘留的洗液。
• 在吸水紙上拍打，盡可能地將水拍干。
• 每孔加入100 μl底物溶劑，室溫孵育10min。
• 每孔加入 100 μl 終止液。
• 對比標準和樣品的顏色，或在OD450 nm讀數。